Desarrollo y validación de un método de suspensión basado en células Vero para la detección del virus Zika / Development and validation of a vero cell-based suspension method for the detection of Zika virus

Objetivo . Desarrollar y validar un método de suspensión celular utilizando células Vero 76 para el cultivo del virus Zika (ZIKV) basado en la infección de células recién sembradas no adheridas. Material y métodos . Se utilizaron tres multiplicidades de infección diferentes del ZIKV para desarrollar y comparar este novedoso método con el método estándar de monocapa de células confluentes. Además, validamos preliminarmente el método de suspensión utilizando muestras clínicas caracterizadas como positivas o negativas para el ZIKV. El método estándar de monocapa se utilizó como método de referencia, y el aislamiento viral se confirmó mediante un RT-PCR específico del ZIKV. Se estimó la sensibilidad e intervalos de confianza del 95% para el método de suspensión. Asimismo, se realizó una comparación técnica del método de suspensión contra el método de monocapa. Resultados . Nuestros hallazgos sugieren que tanto la carga viral como la replicación del ZIKV fueron comparables entre los métodos de infección en monocapa y en suspensión. Aunque ambos métodos fueron adecuados para cultivar y aislar el ZIKV, el método de suspensión se caracterizó por ser más fácil, barato y rápido, así como una técnica de aislamiento sensible. En comparación con el método de monocapa, el método de suspensión fue cuatro veces más sensible en la detección del ZIKV en casos inconclusos por RT-PCR. Conclusiones . El método de suspensión tiene el potencial de ser un método eficaz para cultivar y aislar el ZIKV y su uso es potencialmente útil tanto en la investigación como en entornos clínicos.

Objective. To develop and validate a cell suspension method using Vero 76 cells for culturing Zika virus (ZIKV) based on infection of detached freshly seeded cells. Material and methods. Three different multiplicities of infection of ZIKV were used to develop and compare this novel method to the standard confluent cell monolayer method. In addition, we preliminary validated the cell suspension method using well-characterized ZIKV positive and negative clinical samples. The standard confluent cell monolayer method was used as the reference method, and viral isolation was confirmed by a ZIKV-specific RT-PCR. The sensitivity and its 95% confidence intervals for the cell suspension method were estimated. Also, a technical comparison of the cell suspension method against the cell monolayer method was performed. Results. Our findings suggested that both the viral load and replication of ZIKV were comparable between both monolayer- and suspension-infection methods. Although both methods were suitable for culturing and isolating ZIKV, the cell suspension method was easier, cheaper, and quicker as well as a sensitive isolation technique. The cell suspension method was significantly more sensitive in detecting Zika in inconclusive cases by RT-PCR, with a fourfold increase compared to the confluent cell monolayer method. Conclusion. The cell suspension method has the potential to be an effective method for cultivating and isolating ZIKV and its application is potentially useful in both research and clinical settings.

Actividad antimicrobiana de la peroxiadenosina en cultivos in vitro de Staphylococcus aureus resistente a meticilina / Antimicrobial activity of peroxyadenosine in vitro culture of resistant methicillin Staphylococcus aureus

RESUMEN Fundamento : las infecciones asociadas a la asistencia sanitaria y de la comunidad causadas por Staphylococcus aureus resistente a la meticilina, constituyen un problema de salud en el mundo. Esta situación se asocia al uso indiscriminado de antimicrobianos y a la mutagénesis bacteriana, por tanto, el desarrollo de nuevos productos con actividad antimicrobiana constituye una prioridad para Cuba. Objetivo : evaluar la actividad antimicrobiana de la peroxiadenosina en cultivo in vitro de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina. Métodos : se realizó un estudio experimental de laboratorio en un modelo biológico (cultivo microbiano) en el Hospital Universitario Amalia Simoni de la provincia Camagüey, desde enero de 2016 hasta julio de 2020. La muestra se conformó con 60 cultivos biológicos de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina, mediante un muestreo aleatorio simple, distribuidos en dos grupos, cada uno con 30 cultivos. Un grupo correspondió a una cepa salvaje de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina, obtenida de la colección de cultivos del hospital y el otro a la cepa de referencia (ATCC 25923) de la American Type Culture Collection. Se estudiaron las variables: formación y concentración de la peroxiadenosina, preservación de la estructura aromática de la adenosina y el patrón de susceptibilidad a la meticilina. Resultados : la peroxiadenosina se formó a partir de la interacción del peróxido de hidrógeno con la adenosina. Los cultivos de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina se mostraron sensibles a las concentraciones de peroxiadenosina sin diluir y 1:2, demostrado por la presencia de halos de inhibición en el cultivo. Conclusiones : la inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina por la peroxiadenosina sugiere su evaluación como un nuevo producto antibacteriano eficaz contra este microorganismo.

ABSTRACT Background: infections associated with healthcare and the community caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) constitutes a health problem in the world. This situation is associated with the indiscriminate use of antimicrobials and bacterial mutagenesis, therefore, the development of new products with antimicrobial activity is a priority for Cuba. Objective: to evaluate the antimicrobial activity of peroxyadenosine in vitro culture of MRSA. Methods: an experimental laboratory study was carried out in a biological model (microbial culture) at the Amalia Simoni Hospital in Camagüey province, from January 2016 to July 2020. The sample consisted of 60 biological cultures through simple random sampling, distributed in two groups with 30 crops of each investigated layer. One group corresponded to a wild MRSA strain, obtained from the hospital culture collection and the other to the reference strain (ATCC 25923) from the American Type Culture Collection. The studied variables were: formation and concentration of peroxyadenosine, preservation of the aromatic structure of adenosine and the pattern of susceptibility to methicillin. Results: peroxyadenosine was formed from the interaction of hydrogen peroxide with adenosine. The MRSA cultures were sensitive to 1: 2 undiluted peroxyadenosine concentrations, demonstrated by the presence of inhibition halos in the culture. Conclusions: the inhibition of MRSA growth by peroxyadenosine suggests its evaluation as a new antibacterial product effective against this microorganism.

Preservation fluid cultures. Clinical significance in liver transplantation / Cultivos de líquido de preservación en trasplante hepático. Significancia clínica

Abstract The aim of this study was to determine the incidence of preservation fluids (PF) bacterial positive cultures, identify the germs involved, determine their correlation with infections in recipients during the postoperative period and compare outcomes in terms of morbidity, hospital stay and both patient and graft survival. We describe incidence and etiology of germs developed in PF cultures in our series and evaluate its impact on recipients. A prospective study in deceased donor liver transplants (LT) recipients was carried out from January 2014 to December 2017. Back table PF cultures were analized considering positive the development of any germs and negative to no signs of growth after 5 days. PF were classified as contamination or pathogens. Targeted antibiotic therapy was administered in the last ones. Recipients were divided in: PF (-) and PF(+). Recipients infections related to positive PF were analyzed. These were identified as "direct correlation" when the same germ grew up in PF. Hospital stay and 30 days follow up were compared. Eighty-eight patients PFs were included, 38% (33) had positive cultures, 28 (85%) of these were considered contamination and only 5 as pathogens. We found no differences in postoperative infections (p 0.840), ICU and total hospital stay (p 0.374 and 0.427) between both groups. Postoperative infections and hospital stay seem not to be influenced by PF cultures positivity. Treatment of isolated pathogens could have prevented infections, therefore, those groups that perform PF cultures should consider treatment in these cases and conclude prophylaxis when PF is negative or contaminated.

Resumen Las infecciones bacterianas son frecuentes en pacientes sometidos a trasplante hepático. Describimos la incidencia y etiología de los cultivos de líquidos de preservación (LP) positivos en nuestra serie y analizamos su importancia clínica. Se trata de un trabajo prospectivo de pacientes trasplantados hepáticos, entre enero 2014 a diciembre 2017. Se analizaron muestras de LP tomadas al finalizar la mesa de banco, considerándose positivo el desarrollo de cualquier germen y negativo la ausencia del mismo luego de 5 días. Los LP positivos se clasificaron en: con contaminantes y con patógenos. Los pacientes con LP patógenos recibieron tratamiento antibiótico de acuerdo al antibiograma. Los pacientes fueron divididos en dos grupos: con LP + y LP-. Las infecciones relacionadas a los LP fueron analizadas. Se consideró "correlación directa" cuando el mismo germen desarrolló en el LP y en el recipiente. Se comparó estadía hospitalaria en ambos grupos. Se incluyeron 88 pacientes, 38% (33) presentaron LP+, de los que el 85% (28) fueron por contaminación y 5 por pa tógenos. No se hallaron diferencias significativas en infecciones postoperatorias (p 0.840) y estadía hospitalaria (p 0.427) entre ellos. No hubo casos de "correlación directa". Las infecciones postoperatorias y la estadía hospitalaria de los pacientes no parecen estar influidas por la positividad de los cultivos de LP. El tratamiento dirigido a los gérmenes aislados como patógenos pudo prevenir infecciones, por lo tanto, los grupos que realizan cultivos de rutina deberían considerar el tratamiento en estos casos y finalizar la profilaxis cuando el LP sea negativo o contaminado.

Microbiological profile of leg ulcer infections: review study / Perfil microbiológico de las infecciones de ulceras de pierna: estudio de revisión / Perfil microbiológico das infecções de úlceras de perna: estudo de revisão

ABSTRACT Objectives: to analyze the microbiological profile of leg ulcers of patients treated at outpatient clinics and hospitals regarding the type of microorganism, microbiological selection of antibiotics, and techniques for the collection of culture material. Methods: literature review performed on LILACS, IBECS, MEDLINE, and CINAHL databases, resulting in a descriptive analysis of 27 studies. Results: 35.7% of the studies occurred in an outpatient care scenario; and 64.2% in hospitals. There was a predominance of swab (100%) in outpatient care and biopsy (55.5%) in the hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus were more common at both levels of assistance. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus was isolated in both. Conclusions: the microbiological profile of infections was similar, with the presence of resistant bacteria in both environments. This fact causes concern and raises the need for research to elucidate it. The studies did not compare the effectiveness between biopsy and swab.

RESUMEN Objetivos: analizar perfil microbiológico de úlceras de pierna de pacientes atendidos en ambulatorio y hospital cuanto al tipo de microorganismo, selección microbiológica a los antibióticos y técnicas de recogida de material para cultura. Métodos: revisión de literatura realizada en bases LILACS, IBECS, MEDLINE y CINAHL, resultando en 27 estudios analizados descriptivamente. Resultados: ocurrieron en ambulatorio, 35,7% de los estudios; y en hospitales, 64,2%. Predominaron swab (100%) en ambulatorio y biopsia (55,5%) en hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus fueron más comunes en dos niveles de asistencia. Hubo el aislamiento de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina en ambos. Conclusiones: perfil microbiológico de las infecciones fue semejante, con presencia de bacterias resistentes en los dos ambientes. Ese hecho causa preocupación y suscita necesidad de investigaciones para elucidarlo. Estudios no compararon la efectividad entre biopsia y swab.

RESUMO Objetivos: analisar o perfil microbiológico de úlceras de perna de pacientes atendidos em ambulatório e hospital quanto ao tipo de microrganismo, seleção microbiológica aos antibióticos e técnicas de coleta de material para cultura. Métodos: revisão da literatura realizada nas bases LILACS, IBECS, MEDLINE e CINAHL, resultando em 27 estudos analisados descritivamente. Resultados: ocorreram em ambulatório, 35,7% dos estudos; e em hospitais, 64,2%. Predominaram swab (100%) em ambulatório e biópsia (55,5%) no hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e o Staphylococcus aureus foram mais comuns nos dois níveis de assistência. Houve o isolamento de Staphylococcus aureus resistente à meticilina em ambos. Conclusões: o perfil microbiológico das infecções foi semelhante, com presença de bactérias resistentes nos dois ambientes. Esse fato causa preocupação e suscita necessidade de pesquisas para elucidá-lo. Os estudos não compararam a efetividade entre biópsia e swab.

Microbiological profile of leg ulcer infections: review study / Perfil microbiológico de las infecciones de ulceras de pierna: estudio de revisión / Perfil microbiológico das infecções de úlceras de perna: estudo de revisão

ABSTRACT Objectives: to analyze the microbiological profile of leg ulcers of patients treated at outpatient clinics and hospitals regarding the type of microorganism, microbiological selection of antibiotics, and techniques for the collection of culture material. Methods: literature review performed on LILACS, IBECS, MEDLINE, and CINAHL databases, resulting in a descriptive analysis of 27 studies. Results: 35.7% of the studies occurred in an outpatient care scenario; and 64.2% in hospitals. There was a predominance of swab (100%) in outpatient care and biopsy (55.5%) in the hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus were more common at both levels of assistance. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus was isolated in both. Conclusions: the microbiological profile of infections was similar, with the presence of resistant bacteria in both environments. This fact causes concern and raises the need for research to elucidate it. The studies did not compare the effectiveness between biopsy and swab.

RESUMEN Objetivos: analizar perfil microbiológico de úlceras de pierna de pacientes atendidos en ambulatorio y hospital cuanto al tipo de microorganismo, selección microbiológica a los antibióticos y técnicas de recogida de material para cultura. Métodos: revisión de literatura realizada en bases LILACS, IBECS, MEDLINE y CINAHL, resultando en 27 estudios analizados descriptivamente. Resultados: ocurrieron en ambulatorio, 35,7% de los estudios; y en hospitales, 64,2%. Predominaron swab (100%) en ambulatorio y biopsia (55,5%) en hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus fueron más comunes en dos niveles de asistencia. Hubo el aislamiento de Staphylococcus aureus resistente a la meticilina en ambos. Conclusiones: perfil microbiológico de las infecciones fue semejante, con presencia de bacterias resistentes en los dos ambientes. Ese hecho causa preocupación y suscita necesidad de investigaciones para elucidarlo. Estudios no compararon la efectividad entre biopsia y swab.

RESUMO Objetivos: analisar o perfil microbiológico de úlceras de perna de pacientes atendidos em ambulatório e hospital quanto ao tipo de microrganismo, seleção microbiológica aos antibióticos e técnicas de coleta de material para cultura. Métodos: revisão da literatura realizada nas bases LILACS, IBECS, MEDLINE e CINAHL, resultando em 27 estudos analisados descritivamente. Resultados: ocorreram em ambulatório, 35,7% dos estudos; e em hospitais, 64,2%. Predominaram swab (100%) em ambulatório e biópsia (55,5%) no hospital. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e o Staphylococcus aureus foram mais comuns nos dois níveis de assistência. Houve o isolamento de Staphylococcus aureus resistente à meticilina em ambos. Conclusões: o perfil microbiológico das infecções foi semelhante, com presença de bactérias resistentes nos dois ambientes. Esse fato causa preocupação e suscita necessidade de pesquisas para elucidá-lo. Os estudos não compararam a efetividade entre biópsia e swab.

Detección de un mosaico de trisomía 21 en líquido amniótico / Detection of a mosaicism of trisomy 21 in amniotic liquid

Resumen Se analizó un resultado con alteración cromosómica tomado de una base de datos conformada por un total de 4755 muestras de líquido amniótico extraídos mediante amniocentesis con indicación de su médico tratante, riesgo sérico y edad materna avanzada. En este reporte se presenta la detección de un mosaico de trisomía 21 en líquido amniótico, mediante la técnica de Banda G donde se analizaron 20 metafases. Los resultados obtenidos documentan una composición cromosómica 47, XY+21 y 46, XY con una relación 9:11 respecto a las metafases analizadas, confirmándose así el diagnóstico del Síndrome de Down secundario a mosaico.

Abstract A result with chromosomal alteration was analyzed from a database consisting of a total of 4755 samples of amniotic fluid extracted by amniocentesis with indication of the attending physician, serum risk and advanced maternal age. This report presents the detection of a mosaicism of trisomy 21 in amniotic fluid, using G- Banding where 20 metaphases were analyzed. The results obtained document a chromosomal composition 47, XY + 21 and 46, XY with a 9:11 ratio with respect to the metaphases analyzed, confirming the diagnosis of Down syndrome secondary to mosaicism.

Subgingival microbiological profile of periodontitis patients in Dominican Republic

The aim of this study was to evaluate the deproteinization of primary enamel by analyzing etching pattern types, with and without the application of 5% NaOCl before acid etching with 37% H3PO4. Fifteen extracted human primary molars were randomly selected for the present in vitro study; 1mm x 1mm blocks were prepared and divided into two groups (n = 21). These groups were treated as follows: Group AAcid Etching with 37% H3PO4 gel for 15 s; Group B5% NaOCl for 60 s + Acid Etching with 37% H3PO4for 15 s. The specimens were prepared for scanning electron microscopy analysis. The images were evaluated for quality types I and II etching of the enamel surface using ImageJ software. Datasets were checked for normality by KolgomorvSmirnov test and the nonparametric unpaired MannWhitney test was applied. The mean surface area of type I and II etching pattern values was 1922.314 µm2for Group A and 3840.473 µm2Group B. We conclude that deproteinization with 5% NaOCl prior to acid etching can be used to increase the area of adhesion and the quality of the etching pattern (AU)

El objetivo del estudio fue evaluar la desproteinización del esmalte primario a través de los tipos de patrones de grabado, con y sin NaOCl 5% utilizado antes del grabado ácido con H3PO4 37%. Quince dientes primarios humanos extraídos se seleccionaron al azar para el presente estudio in vitro, se prepararon bloques de 1mm x 1 mm y se dividieron en dos grupos (n = 21). Estos grupos se trataron de la siguiente manera: Grupo A: Grabado ácido con H3PO4 37% en gel durante 15 segundos; Grupo B: NaOCl 5% durante 60 segundos + Grabado ácido con H3PO4 37% durante 15 segundos. Las muestras se prepararon para el análisis de microscopía electrónica de barrido. Las imágenes obtenidas se evaluaron principalmente por la calidad de los grabados tipo I y II de la superficie del esmalte primario, utilizando el software Image J. Los datos se analizaron en cuanto a su normalidad mediante la prueba de KolgomorvSmirnov, se utilizó pruebas no paramétricas: Prueba de MannWhitney no pareada. Como resultado, se encontró que el área de superficie media de los valores de patrón de grabado de tipo I y II para el Grupo A era 1922,314 µm2 y el Grupo B era 3840,473 µm2. Finalmente, llegamos a la conclusión de que se puede usar la desproteinización con NaOCl 5% antes del grabado ácido para aumentar el área de adhesión y la calidad del patrón de grabado (AU)

Modulation of in vitro osteoclast activity mediated by different doses of parathyroid hormone / Modulación in vitro de la actividad osteoclástica mediada por diferentes dosis de hormona paratiroidea

Bone remodeling is a process regulated by the interaction between cells and various molecules such as parathyroid hormone (PTH). The aim of the study was to evaluate the effect of different doses of PTH on osteoclast activity in a culture model of bone organs. Six-day-old male C57BL/6 mice (n=14) were euthanized and the calvariae were dissected and sectioned in the middle, keeping the periosteal and endosteal. The bone fragments were divided into three groups: Group I (control - without adding PTH), Group II (addition of 3 nM PTH) and Group III (30 nM PTH), all cultured in aMEM for up to 72 h osteoclast activity was evaluated by biochemical quantification of calcium released in the culture medium at intervals of 24, 48, and 72 h and by histomorphometric analysis of bone resorption lacunae at 72 h our results show that group II exhibited significantly higher values of calcium levels in the medium compared to group I (p<0.05) in all intervals, also being higher for group III at 24 hours (p<0.05). Group II promoted a greater demineralization area (22068 ± 2193 mm2) than those found in group I (2084 ± 38 mm2) and group III (8952 ± 246 mm2), with statistically significant difference (p<0.001) among all groups. We concluded that in culture model of bone organs PTH promotes higher bone resorption when administered in lower doses.

La remodelación ósea es un proceso regulado por la interacción entre las células y varias moléculas como la hormona paratiroidea (PTH). El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de diferentes dosis de PTH sobre la actividad de los osteoclastos en un modelo de cultivo de órganos óseos. Se sacrificaron ratones C57BL/6 machos, de 6 días de edad (n = 14), y se disecaron y seccionaron las calvarias, manteniendo el periostio y endostio. Los fragmentos óseos se dividieron en tres grupos: Grupo I (control - sin adición de PTH), Grupo II (adición de 3 mM de PTH) y Grupo III (30 nM de PTH), todos cultivados en aMEM hasta 72 horas. La actividad de los osteoclastos se evaluó mediante la cuantificación bioquímica de calcio liberado en medio de cultivo, a intervalos de 24, 48 y 72 horas, y por análisis histomorfométrico de las lagunas de resorción ósea a las 72 horas. Nuestros resultados muestran que el grupo II exhibió valores significativamente más altos de calcio en el medio, comparado con el grupo I (p <0.05) en todos los intervalos, siendo también más alto para el grupo III a las 24 horas (p <0.05). El grupo II promovió una mayor área de desmineralización (22068 ± 2193 mm2) que los encontrados en el grupo I (2084 ± 38 mm2) y en el grupo III (8952 ± 246 mm2), con diferencia estadísticamente significativa (p <0,001) entre todos los grupos. Concluimos que en el modelo de cultivo de órganos óseos la PTH promueve una mayor resorción ósea cuando se administra en dosis más bajas.

Aloinjertos análogos de mucosa bucal en ratas no consanguíneas / Oral mucosa analog allografts in non-consanguineous rats

Resumen Introducción: A pesar de que existen opciones terapéuticas para el tratamiento de defectos de la mucosa bucal, persiste la necesidad de encontrar sustitutos funcionales, anatómicos y estéticamente similares al tejido que se va a reemplazar, así como soluciones que reduzcan la morbilidad de los injertos autólogos. Objetivo: Determinar la compatibilidad clínica e histológica de aloinjertos equivalentes de mucosa bucal elaborados mediante ingeniería tisular en ratas no consanguíneas. Materiales y métodos: Se utilizó una muestra de mucosa bucal de ratas Sprague Dawley para la obtención de un cultivo de fibroblastos y otro de queratinocitos y fibroblastos. En ambos casos, se usó una membrana de colágeno comercial como soporte. Después de diez semanas de cultivo, las membranas resultantes se injertaron en cuatro ratas Wistar. La primera fase del estudio consistió en la elaboración de los tejidos análogos de mucosa bucal mediante ingeniería tisular, los cuales se implantaron en ratas Wistar inmunocompetentes; posteriormente, se evaluaron las características clínicas e histológicas del aloinjerto. Resultados: La evaluación in vivo de los tejidos análogos demostró que se habían integrado correctamente en los huéspedes inmunocompetentes, y se había logrado el aumento del biotipo periodontal y la creación de una zona con mayor queratinización. Desde el punto de vista histológico, el tejido adquirió características similares a las de la muestra de mucosa bucal de control, sin ningún tipo de reacción inflamatoria ni signos clínicos o histológicos de rechazo. Conclusión: Hubo compatibilidad clínica e histológica de los aloinjertos equivalentes de mucosa bucal obtenidos mediante ingeniería tisular.

Abstract Introduction: Although there are therapeutic options for the treatment of oral mucosa defects, the need for functional, anatomical and aesthetically similar substitutes persists, as well as for solutions to reduce autologous grafts morbidity. Objective: To determine clinical and histological compatibility of equivalent oral mucosa allografts generated through tissue engineering in non-consanguineous rats. Materials and methods: We used a sample of oral mucosa from Sprague Dawley rats to obtain a fibroblast culture and a keratinocytes and fibroblasts co-culture. In both cases, we used a commercial collagen membrane as "scaffold". After ten weeks of culture, we grafted the resulting membranes into four Wistar rats. The first phase of the study was the development of the oral mucosa equivalents generated by tissue engineering. Then, we implanted them in immunocompetent Wistar rats, and finally we evaluated the clinical and histological features of the allografts. Results: In vivo evaluation of mucosal substitutes showed a correct integration of artificial oral mucosa in immunocompetent hosts, with an increase in periodontal biotype and the creation of a zone with increased keratinization. Histologically, the tissue was similar to the control oral mucosa sample with no inflammatory reaction nor clinical or histological rejection signs. Conclusion: The equivalent oral mucosa allografts generated by tissue engineering showed clinical and histological compatibility.

Primer embarazo con transferencia de embriones seleccionados por morfocinética en el Perú / First pregnancy with transfer of morphokinetics-selected embryos in Peru

La selección embrionaria usando características morfológicas observadas por pocos segundos bajo el microscopio, ha sido la principal herramienta de selección en las técnicas de reproducción asistida. Sin embargo, el desarrollo embrionario es un proceso dinámico que con la introducción de incubadoras con microcámaras integradas, conocidas como incubadoras con sistema Time Lapse, ha permitido registrar eventos morfológicos y cinéticos del desarrollo embrionario que pueden ser útiles como marcadores de selección, denominándolos parámetros 'morfocinéticos'. En este reporte de caso damos a conocer el primer embarazo en el Perú mediante la transferencia de embriones seleccionados por parámetros morfocinéticos en una incubadora con sistema Time Lapse.

Embryo selection by using morphological characteristics has been the main tool to select the best embryo to transfer in assisted reproduction technology (ART). However, embryo development is a dynamic process that cannot be monitored with conventional microscopes. The introduction of incubators with an integrated micro-camera system, denominated time-lapse incubators, has allowed to register morphological and kinetic events in human embryos, be coming useful markers for embryo selection. In this report, we present the first pregnancy in Peru using morphokinetic parameters in a time lapse incubator.

Estudio preliminar del tratamiento de úlceras crónicas con equivalentes cutáneos obtenidos por ingeniería de tejidos / Preliminary Study of the Treatment of Chronic Skin Ulcers with Tissue-engineered Skin Equivalents

Las úlceras de las extremidades inferiores son afecciones de incidencia y prevalencia elevada, cuya cronicidad y persistencia en hacer recidivas son dos de las características evolutivas más relevantes. A pesar de un tratamiento etiológico correcto, a lo cual se suma una gran variedad de apósitos disponibles, el porcentaje de curación y la velocidad de cicatrización siguen siendo bajos. Por tanto se realizó un estudio con el objetivo de obtener un sustituto de piel para su aplicación en la clínica. Se aislaron y cultivaron queratinocitos, que fueron sembrados a una alta densidad, en un sustrato optimizado de fibrina con fibroblastos. De esta forma se desarrolló un nuevo equivalente cutáneo más práctico y de bajo costo, cuyo transplante es directo y de fácil aplicación. Antes de comenzar los estudios clínicos para evaluar sus ventajas y su alcance, se hizo una prueba preliminar con el fin de ver si los cambios efectuados en la técnica estándar no impedían su viabilidad y su acción. A tal fin fueron seleccionaron seis pacientes con ulceras crónicas, sin curación mediante todo tratamiento, a quienes se les aplicaron los nuevos equivalentes. Los pacientes tratados mostraron que los equivalentes eran viables, efectivos, de fácil manipulación y de rápida acción sobre los tejidos afectados. Todos los pacientes que completaron el procedimiento se recuperaron, fue excelente ejemplo un paciente con una lesión crónica de seis meses de evolución que había sido refractaria a los múltiples tratamientos convencionales empleados.

Ulcers of the lower extremities have high prevalence and incidence. Their chronicity and frequent recurrences are two of their most important characteristics. Despite proper etiologic treatment and the great variety of dressings available, the healing rate and recovery speed remain low. Therefore, we conducted a study to obtain skin substitutes for clinical application by isolating and cultivating keratinocytes, which were seeded on a fibroblast-containing fibrin gel at high density. Hence, a new practical and inexpensive skin equivalent of straightforward and easy-to-perform transplantation was developed. Before starting the clinical trials to evaluate its advantages and applicability, we conducted a preliminary test to determine if the changes to the standard technique affected its feasibility and action. For this purpose, we implanted the new equivalents into six patients with chronic ulcers unresponsive to treatment. Outcomes in these patients showed that skin equivalents were feasible, effective, easy to handle and had rapid action on target tissues. All patients who completed the procedure recovered. An excellent example was a patient with a chronic lesion refractory to multiple conventional treatments that had been present for six months.

El adipocito en el laboratorio: historia, perspectivas y reporte de experiencia / The adipocyte in the laboratory: history, perspectives and report of experience

Introducción: el tejido adiposo humano está compuesto por diferentes tipos celulares, y ha sido objeto de múltiples estudios en los últimos años debido a su acción en diversas funciones. Métodos: se realizó una búsqueda bilbiográfica en PubMed, Scielo, Science Direct and Google Scholars y se reporta la experiencia de los autores. Resultados: los primeros modelos de estudio fueron con tejido de roedores, y permitieron la comprensión del metabolismo de carbohidratos y ácidos grasos y facilitaron el estudio de la biología del adipocito, junto a estudios histológicos y el aislamiento de adipocitos maduros. Posteriormente se realizaron estudios con células precursoras (preadipocitos) que propiciaron el aislamiento de la línea celular 3T3-1L murina. En Latinoamérica, se han realizado diversos estudios con líneas celulares y con células madre mesenquimales precursoras de adipocitos para estudiar el efecto de hormonas y otras sustancias y para genotipificación. En Colombia se han realizado estudios con adipocitos 3T3-L1 para determinar los efectos de medicamentos y sustancias en estas células. En el laboratorio de Fisiología Celular de la Universidad Tecnológica de Pereira el proceso de obtención de muestras ha evidenciado dificultades por tratarse de tejido humano, pero el protocolo de aislamiento y cultivo pudo ser estandarizado a lo largo de seis años de experimentación; se aislaron preadipocitos y adipocitos maduros que permitieron estudiar los efectos de hormonas, realizar caracterización electrofisiológica y estudiar la fisiología del calcio. Conclusiones: este es un campo de investigación muy relevante debido a la implicación de este tipo celular en funciones metabólicas sistémicas y su relación con patologías de alta prevalencia como la obesidad y el síndrome metabólico.

Introduction: The human adipose tissue is composed of different cell types. It has been subject of several studies in the past years due to its role on diverse functions. Methods: A search in the PubMed, Scielo, Science direct and Google Scholars databases was performed and the authors experience was reported. Results: The first model used was rodent fat, which allowed a better comprehension on carbohydrate and fatty acid metabolism and enhanced research in adipocyte cell biology in addition with histological studies and mature adipocyte isolation. Afterwards, learning about precursor cell (pre-adipocytes) promoted the isolation of murine 3T3-L1 cell line. In Latin America research has been conducted using cell lines and adipocyte precursor mesenchymal stem cells to describe effects of hormones and perform DNA sequencing. In Colombia, studies in 3T3-L1 cell line aimed to stablish the effects of different compounds on these cells. In the Cell Physiology Laboratory of the Universidad Tecnológica de Pereira, sample collection process has shown difficulties because the source was human tissue; nevertheless isolation and cell culture protocols were standardized throughout the last six years of experimentation. Pre-adipocytes and mature adipocytes were isolated to study the effects of hormones, perform electrophysiological characterization and study calcium physiology. Conclusions: This is a relevant research field since these cells have important systemic metabolic functions and they have a clear relationship with high-prevalence pathologies such as obesity and the metabolic syndrome.

Efeito da terapia ultrassônica de baixa intensidade em cultura celular de fibroblastos / Efecto del ultrasonido de baja intensidad en cultivo celular de fibroblastos / Effect of low-intensity pulsed ultrasound therapy on a fibroblasts cell culture

Dentro da prática fisioterápica verifica-se a ampla utilização do ultrassom terapêutico para tratamento das diversas afecções musculoesqueléticas. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da irradiação Ultrassônica de Baixa Intensidade, com diferentes regimes de pulsos e intensidade, em cultura celular de fibroblastos L929 (ATCC CCL-1 NCTC), de modo a verificar a viabilidade celular e definir parâmetros de dosimetria. Para isso, utilizou-se a aplicação de ultrassom pulsado, com frequência de 1Mhz, em cultura de células fibroblásticas, divididas em cinco grupos (controle e com intensidade instantâneas de 0,3W/cm2-10%; 0,3W/cm2 -20 %; 0,5W/cm2 -10% e US 0,5W/cm2 -20 % - 100Hz). A irradiação ocorreu com intervalos de 24, 48 e 72 horas, por dois minutos, e após 24 horas de cada irradiação foi realizado teste de MTT Brometo de [3-(4,5-dimetiltiazol)-2,5-difeniltetrazólio]. Os resultados revelaram que ao compararem-se os valores de células viáveis pelo método MTT nos cinco grupos, não foi possível encontrar diferença estatisticamente significativa em nenhum deles, nos três momentos avaliados (24, 48 e 72 horas); enquanto que, ao se realizar a análise de medida repetida nos diferentes grupos, encontrou-se diferença estatisticamente significativa apenas no grupo irradiado com ultrassom a 0,5W/ cm2com regime de pulso de 10% (p=0,003). Com base nesses resultados, conclui-se que a irradiação Ultrassônica de Baixa Intensidade em cultura celular de fibroblastos L929, somente no grupo com intensidade de 0,5W/cm2-10% obteve o crescimento numérico, com significância estatística em todos os períodos de avaliação.

En la práctica fisioterápica se utiliza bastante el ultrasonido como terapia para el tratamiento de diversos trastornos muscoloesqueléticos. Este artículo tiene por objetivo evaluar el efecto de la irradiación ultrasónica de baja intensidad, con diferentes regímenes de pulsos y de intensidades, en cultivo celular de fibroblastos L929 (ATCC CCL-1 NCTC), para verificar la viabilidad celular y establecer los parámetros de dosimetría. Se utilizó el ultrasonido pulsado, con frecuencia de 1Mhz, en un cultivo de células fibroblásticas, divididas en cinco grupos (con control y con la intensidad instantánea del 0,3W/cm2-10%; 0,3W/cm2 -20%; 0,5W/cm2 -10% y US 0,5W/cm2-20 % - 100Hz). La irradiación se llevó a cabo en intervalos de 24, 48 y 72 horas, durante dos minutos y después de las 24 horas de cada irradiación se realizó la prueba de MTT {Bromuro de [3-(4,5-dimetiltiazol)-2,5-difeniltetrazólio]}. Los resultados mostraron que en la comparación entre los valores de células viables por el método MTT en los cinco grupos evaluados no ha sido posible encontrar ninguna diferencia estadísticamente significativa en los tres momentos evaluados (24, 48 y 72 horas). En cambio, al llevar a cabo el análisis de medida repetida en los diferentes grupos, se obtuvo una diferencia estadísticamente significativa solamente en el grupo irradiado con ultrasonido a 0,5W/cm2 con el régimen de pulso del 10% (p=0,003). Basándose en estos resultados se concluyó que la irradiación ultrasónica de baja intensidad en cultivo celular de fibroblastos L929 obtuvo el aumento sólo en el grupo con intensidad de 0,5W/cm2-10%, con significancia en todos los periodos de evaluación.

Within the physiotherapy practice there is a wide use of therapeutic ultrasound for the treatment of various musculoskeletal disorders. The aim of this study was to evaluate the effect of Low Intensity Ultrasonic irradiation with differents forms of pulse and intensity in cell culture of L929 fibroblasts (ATCC CCL-1 NCTC), in order to check cell viability and define parameters of dosimetry. For this purpose, it was used the application of pulsed ultrasound with a frequency of 1MHz in cultured fibroblast cells divided into five groups (control and instantaneous intensity of 0.3W/cm2-10%, 0.3W/cm2 -20%, 0.5W/cm2-10% and US 0.5W/cm2-20% - 100Hz). Irradiation occurred at intervals of 24, 48 and 72 hours for two minutes and 24 hours after each irradiation test MTT [3-(4,5-dimethylthiazol)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] was performed. Results showed that when comparing the values of viable cells by MTT method in the five groups, we could not find statistically significant difference in any of them, in these three conditions (24, 48 and 72 hours); while. Whereas, when performing the analysis of repeated measures in the different groups, it was found a statistically significant difference only in the group irradiated with ultrasound at 0.5W/cm2 with pulse regime of 10% (p=0.003). Based on these results, it is concluded that the Low Intensity Ultrasonic irradiation in L929 fibroblast cell culture, only in the group with an intensity of 0.5W/cm2 -10% obtained numerical growth, with statistical significance in all periods evaluation.

Collection of tracheal aspirate: safety and microbiological concordance between two techniques / Recolección de aspirado traqueal: seguridad y concordancia microbiológica entre dos técnicas / Colheita de aspirado traqueal: segurança e concordância microbiológica entre duas técnicas

Objective: To evaluate the safety of the performance of the traditional and protected collection techniques of tracheal aspirate and to identify qualitative and quantitative agreement of the results of microbiological cultures between the techniques. Method: Clinical, prospective, comparative, single-blind research. The sample was composed of 54 patients of >18 years of age, undergoing invasive mechanical ventilation for a period of ≥48 hours and with suspected Ventilator Associated Pneumonia. The two techniques were implemented in the same patient, one immediately after the other, with an order of random execution, according to randomization by specialized software. Results: No significant events occurred oxygen desaturation, hemodynamic instability or tracheobronchial hemorrhage (p<0.05) and, although there were differences in some strains, there was qualitative and quantitative agreement between the techniques (p<0.001). Conclusion: Utilization of the protected technique provided no advantage over the traditional and execution of both techniques was safe for the patient.
.

Objetivo: Evaluar la seguridad de la ejecución de las técnicas tradicional y protegida de la recolección de aspirado traqueal e identificar la concordancia cualitativa y cuantitativa de los resultados de los cultivos microbiológicos entre estas técnicas. Método: Investigación clínica, prospectiva, comparativa, ciega simple. La muestra fue constituida por 54 pacientes mayores de 18 años que fueron sometidos a ventilación mecánica invasiva durante 48 horas o más y con sospecha de Neumonía Asociada a la Ventilación Mecánica. Las dos técnicas fueron implementadas en el mismo paciente, una inmediatamente posterior a la otra. El orden de ejecución de las técnicas fue aleatorio, hecho por un software especializado. Resultados: No hubo eventos significativos en la disminución de la saturación de oxígeno, inestabilidad hemodinámica y hemorragias traqueo bronquiales (p<0,05) y aunque ocurrieron diferencias en algunas cepas, hubo concordancia cualitativa y cuantitativa entre las técnicas (p<0,001). Conclusión: El uso de la técnica protegida no ofrece ninguna ventaja sobre la técnica tradicional y la aplicación de ambas técnicas es segura para el paciente.
.

Objetivo: Avaliar a segurança da execução das técnicas tradicional e protegida de colheita de aspirado traqueal e identificar a concordância qualitativa e quantitativa dos resultados de culturas microbiológicas entre as técnicas. Método: Pesquisa clínica, prospectiva, comparativa, simples-cega. A amostra foi constituída de 54 pacientes com idade ≥18 anos, submetidos à ventilação mecânica invasiva por período ≥48 horas e com suspeita de Pneumonia Associada à Ventilação Mecânica. As duas técnicas foram implementadas no mesmo paciente, uma imediatamente seguida da outra, sendo a ordem de execução aleatória, segundo randomização por software especializado. Resultados: Não ocorreram eventos significativos de queda da saturação de oxigênio, instabilidade hemodinâmica e hemorragias traqueobrônquicas (p<0,05) e, embora tenham ocorrido divergências em algumas cepas, houve concordância qualitativa e quantitativa entre as técnicas (p<0,001). Conclusão: A utilização da técnica protegida não proporciona vantagem em detrimento da tradicional e a execução de ambas as técnicas foi segura para o paciente.
.

Cultivo de células madre limbares en membrana amniótica para reconstrucción de tejido corneal: una comparación de dos métodos / Limbal stem cell culture on amniotic membrane for corneal tissue reconstruction: a comparison of techniques / Cultivo de células mãe limbares em membrana amniótica para reconstrução de tecido corneano: uma comparação de dois métodos

Objetivo: Obtener un cultivo celular de células del limbus corneal en membrana amniótica como soporte por dos métodos diferentes, suspensión y explante, para obtener datos de confluencia, viabilidad y diferenciación en ambos métodos. Métodología: Muestras de LSC (limbal stem cells, por sus siglas en inglés) fueron obtenidas de 16 donantes cadavéricos. Se realizaron seis cultivos de cada muestra, 3 por el método de suspensión y 3 por el método de explante, todo por triplicado. Como control negativo se utilizó membrana amniótica sin LSCs. Las células fueron cultivadas con SHEM, 37°C, 5% CO2 y 95% de humedad. Los cultivos fueron mantenidos por 14 días con un recambio de medio cada 3 días. El día 14 los cultivos fueron analizados para evaluar viabilidad con azul de tripano, confluencia por microscopio y la diferenciación celular con Inmunohistoquímica para detectar citoqueratina 3/12. Resultados: Como resultado de los experimentos mencionados anteriormente, para los métodos de suspensión y explante, se encontró una viabilidad de 98.92% y 98.32%, una confluencia de 55.95% y 48.27%, una concentración celular de 38.83x104 células/ml y 36.484x104 celulas/ml, y una diferenciación de 22.93% y 16.55%, respectivamente. Conclusiones: Aunque éste estudio compare dos métodos, cultivos en suspensión de LSC y cultivo en explante de LSC, ambos con membrana amniótica como soporte, nosotros encontramos una pequeña diferencia en ellos. Como resultado, el cultivo en suspensión fue mejor que el explante, sin embargo los resultados no son conclusivos, por lo tanto es necesario realizar más investigaciones en este campo para lograr una conclusión con respecto al desempeño de estos dos métodos.

Objective: To grow cells on amniotic membrane corneal limbus with two different methods to assess the confluence, viability and differentiation of both.Methods: LSC samples were obtained from 16 deceased donors. Additionally, six cultures were made from each sample, 3 by LSC suspension method and 3 by LSC explant method, all in triplicate. Furthermore, AMs without oral mucosal cells were used as negative control cultures. The cells were seeded with SHEM, 37°C, 5% CO2, 95% humidity. Moreover, the cultures were maintained for 14 days and the culture medium was changed every other day or every 3 days. Also, on the 14th day, the cultures were analyzed to evaluate viability with trypan blue, confluence with microscopy and cell differentiation with immunohistochemistry to detect cytokeratin 3/12.Results: As a result of the experiments mentioned above, for suspension and explant cultures, we found a viability of 98.92% and 98.32%, a confluence of 55.95% and 48.27%, a final cellular concentration of 38.83x104 cells/ml and 36.484x104 cells/ml, and a differentiation of 22.93% and 16.55%, respectively.Conclusions: Although this study compared two methods, LSC suspension culture and LSC explant culture, both with AM as scaffold, we did find a slight difference between them. As a result, the suspension culture was better than the LSC explant culture, but the results are not conclusive. It is necessary to conduct more research in this field to reach a conclusion regarding the behavior of these two methods

Objetivo: Obter um cultivo celular de células do limbus corneano em membrana amniótica como suporte por dois métodos diferentes, suspensão e explante, para obter dados de confluência, viabilidade e diferenciação em ambos métodos. Métodos: Mostras de LSC (limbal stem cells, por suas siglas em inglês) foram obtidas de 16 doadores cadavéricos. Realizaram-se seis cultivos de cada mostra, 3 pelo método de suspensão e 3 pelo método de explante, tudo por triplicado. Como controle negativo se utilizou membrana amniótica sem LSCs. As células foram cultivadas com SHEM, 37°C, 5% CO2 e 95% de umidade. Os cultivos foram mantidos por 14 dias com uma troca de meio cada 3 dias. O dia 14 os cultivos foram analisados para avaliar viabilidade com azul de tripan, confluência por microscópio e a diferenciação celular com Imunoistoquímica para detectar citoqueratina 3/12. Resultados: Como resultado dos experimentos mencionados anteriormente, para os métodos de suspensão e explante, encontrou-se uma viabilidade de 98.92% e 98.32%, uma confluência de 55.95% e 48.27%, uma concentração celular de 38.83x104 células/ml e 36.484x104 células/ml, e uma diferenciação de 22.935% e 16.558%, respectivamente. Conclusão: Ainda que este estudo compare dois métodos, cultivos em suspensão de LSC e cultivo em explante de LSC, ambos com membrana amniótica como suporte, nós encontramos uma pequena diferença neles. Como resultado, o cultivo em suspensão foi melhor do que o explante, no entanto os resultados não são conclusivos, portanto é necessário realizar mais investigações neste campo para conseguir uma conclusão com respeito ao desempenho destes dois métodos

Cytotoxicity of dental alginates / Citotoxicidad de alginatos dentales

Alginate, or irreversible hydrocolloid, is one of the most accepted impression materials used in dentistry. However, some substances existing in these materials can be toxic. The aim of this study was to assess the cytotoxicity of alginates for dental applications. Fourteen different alginates were assessed: Jeltrate, Jeltrate Plus, Jeltrate Chromatic, Alga Gel, Printer Gel, Ava Gel, New Print, Kromopan 100, Tropicalgin, Cavex Orthotrace, Hydrogum, Orthoprint, Cavex Color Change, and Qualitygel. Three control groups were also used in this study: positive control group (C+) consisting of cell detergent Tween 80, negative control group (C-) consisting of PBS, and cell control group (CC) consisting of non-exposed cells. After manipulating the materials according to the manufacturer’s instructions, samples were made by using silicone rings. Next, the samples were immersed into Eagle’s minimum essential medium (MEM) for 2 minutes followed by removal of supernatants and contact with L929 fibroblasts. After contact with the medium, the cells were incubated for further 24 hours in which 100µl of 0.01 por ciento neutral red stain were added. Cells were incubated again for 3 hours so that the stain could be absorbed. After this period, the cells were fixed and viable cell counting was performed by using a spectrophotometer (BioTek, Winooski, Vermont, USA) at wavelength of 492 nm. The results demonstrated statistical differences between CC and C- groups in relation to other ones (p<0.05). No statistical differences were observed between Jeltrate Plus and Hydrogum groups, between Jeltrate and Jeltrate Chromatic, Printer Gel, Tropicalgin, and Qualitygel groups, and between Jeltrate Chromatic and Alga Gel, Ava Gel, New Print, Kromopan 100, Cavex Orthotrace, Hydrogum, Orhtoprint, and Cavex Color Change groups. One can conclude, based on the results of this study, that all alginate materials were found to be cytotoxic.

El alginato o hidrocoloide irreversible, es uno de los materiales de impresión más aceptados y utilizados en odontología. Sin embargo, algunas substancias existentes en estos materiales pueden ser tóxicas. El objetivo de este estudio fue evaluar la citotoxicidad de los alginatos para aplicaciones dentales. Fueron evaluados 14 alginatos diferentes: Jeltrate, Jeltrate Plus, Jeltrate Chromatic, Alga Gel, Printer Gel, Ava Gel, New Print, Kromopan 100, Tropicalgin, Cavex Orthotrace, Hydrogum, Orthoprint, Cavex Color Change y Qualitygel. También se utilizaron tres grupos de control también se utilizaron en este estudio: grupo control positivo (C+) que consiste en células de detergente Tween 80, el grupo de control negativo (C-) que consiste en PBS, y el grupo de células de control (CC) que consiste de las células no expuestas. Después de la manipulación de los materiales de acuerdo a las instrucciones del fabricante, las muestras fueron hechas mediante el uso de anillos de silicona. A continuación, las muestras se sumergieron en medio mínimo esencial de Eagle (MEM) durante 2 minutos, seguido de la eliminación de los sobrenadantes y el contacto con los fibroblastos L929. En caso de contacto con el medio, las células fueron incubadas durante 24 horas más en 100ml de tinción roja neutra al 0,01 por ciento. Las células se incubaron nuevamente durante 3 horas para que la tinción pueda ser absorbida. Después de este período, las células fueron fijadas y el recuento de células viables se realizó mediante un espectrofotómetro (BioTek, Winooski, Vermont, EE.UU.) a la longitud de onda de 492 nm. Los resultados demostraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos de CC y C- en relación con los demás (p<0,05). No se observaron diferencias estadísticas entre los grupos Jeltrate Plus y Hydrogum, entre Jeltrate y los grupos Jeltrate Chromatic, Printer Gel, Tropicalgin y Qualitygel, y entre Jeltrate Chromatic y los grupos Alga Gel, Ava Gel, New Print, ...

Citotoxicidade da Punica granatum L. (romã) sobre cultura de fibroblastos e de células de linhagem cancerígena / Cytotoxicity of Punica granatum L. (pomegranate) a fibroblast cell line and a carcinoma cell line

Embora diversos estudos já tenham sido realizados sobre a Punica granatum L., seus possíveis efeitos citotóxicos não são bem conhecidos. No presente trabalho foi avaliada a toxicidade da Punica granatum L. (PG) por meio de cultura celular com duas linhagens: fibroblastos humanos de mucosa oral (FLM) e células de carcinoma epidermóide oral humano (KB). As células foram submetidas ao teste de viabilidade celular por 24 horas em placas de 96 poços nas concentrações da PG (1%, 0,5%, 0,25%, 0,125%, 0,062% e 0,031%) e aos testes de citotoxicidade celular em placas de 24 poços, em cinco períodos diferentes (4 horas, 1, 3, 5 e 7 dias) e com quatro diferentes concentrações (1%, 0,5%, 0,25%, 0,062%). Todos os testes foram realizados em triplicata e em três momentos diferentes. Foram adicionados dois grupos, um controle negativo (Tryton 10%) e um controle positivo constituído de meio de cultura acrescido de soro bovino fetal 10% e sem o extrato de PG. A quantificação celular foi realizada pelo método do Resazurin, com avaliação por espectrofotometria óptica (espectrofotômetro UVM340 - AsysHitech GmbH) e leitura de absorbância dos comprimentos de onda de 570 nm a 600 nm. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA (5%). Os resultados de viabilidade mostraram que nas concentrações de 0.031%; 0,062%; 0,125%; 0,25% e 0,05% o extrato de PG inibiu a viabilidade celular (≥ 40%) principalmente das células KB. O teste de citotoxicidade mostrou que apenas as culturas tratadas com PG a 0,062% exibiram citotoxicidade para as linhagens celulares. A PG a 1% foi tóxica para as células FLM e KB. O extrato de PG inibiu a citotoxicidade celular nas demais concentrações testadas. Estes resultados podem ser relacionados a propriedade anti carcinogênica da Punica granatum L.

Several studies have been conducted on Punica granatum L., but their cytotoxic effects are not well known. The purpose of this study was to evaluate the cytotoxicity of Punica granatum L. extract (PG) in two cell lines: human oral mucosa fibroblasts (FLM) and cells of human oral squamous cell carcinoma (KB). The cells were analized to viability on 24 h using different concentrations of PG (1%, 0.5%, 0.25%, 0.125%, 0.062% and 0.031%) and to cell proliferation in five different periods (4 h, 1, 3, 5 and 7 days) using four different concentrations of PG (1%, 0.5%, 0.25%, 0.062%). All tests were performed in triplicate and in three different times. There were a negative control (Tryton 10%) and a positive control (culture medium plus 10% SBF, without PG extract). Cell quantification was performed by the Resazurin method, with evaluation by optical spectrophotometry (spectrophotometer UVM340 - Asys Hitech GmbH) and measure of absorbance at a wave length of 570 nm to 600 nm. Data were submitted to ANOVA (5%). The results showed inhibition of cell proliferation in 0,031%, 0.062%, 0.125%, 0.25% and 0.05% concentrations of PG extract (≥ 40%) specialty to KB cells in comparison to FLM cells. PG 1% was toxic to KB and FLM cells. The proliferation test showed cell proliferation only when using PG 0,062%, for both cell lines and inhibited proliferation whith all other PG concentrations. These effects might be related to the anticarcinogenic properties of PG.

Cultivo primario de queratinocitos humanos sembrados en submucosa intestinal porcina / Primary culture of human keratinocytes planted on pig's intestine Submucosa

En el campo de la regeneración de piel, la ingeniería de tejidos busca superar las limitaciones asociadas con el uso de autoinjertos inmediatos, dado que la elección de una región donante en el paciente, constituye un riesgo para el mismo, además de ser insuficiente cuando la lesión es extensa. Se ha comprobado que el empleo de la submucosa del intestino delgado de cerdo (SIS) (por la sigla en inglés small intestinal submucosa), por su especial composición, como biomaterial de relleno para tratar lesiones, disminuye el dolor y la inflamación desde su primera aplicación y favorece la movilidad temprana de la región lesionada. Con el fin de determinar la utilidad de SIS, como sustituto epidérmico, en el presente estudio se desarrolló un protocolo para el cultivo primario de queratinocitos humanos, provenientes de prepucios infantiles, sobre una matriz de SIS como soporte. Se evaluó el potencial de adherencia y la capacidad de proliferación de queratinocitos sobre este sustrato.

Tissue engineering, in the fields of skin regeneration, seeks to overcome the limitations associated with the use of immediate auto-grafts, since choosing the donor region of the patient constitutes a risk for the patient himself and is insufficient if the injury that has to be repaired is very large. The use of the pig’s small intestine submucosa (SIS) has being proved as a filling biomaterial to treat injuries, because of its special composition, it lowers pain and inflammation since its first application and it favours early mobility to the wounded area. The present study developed a protocol for the primary culture of human keratinocytes from infant foreskins, and used small intestinal submucosa (SIS) like culture substrate. Cellular adherence potential and proliferation capability of the keratinocytes over this substrate was evaluated.